在基因編輯、細(xì)胞功能研究和轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)實驗中，原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染始終是一個繞不開的技術(shù)難點。
不少實驗人員都有類似經(jīng)歷：
在常規(guī)細(xì)胞系中效果良好的轉(zhuǎn)染方案，一旦應(yīng)用到原代細(xì)胞中，轉(zhuǎn)染效率明顯下降，甚至伴隨嚴(yán)重的細(xì)胞死亡。

那么，原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染失敗的原因究竟在哪里？

一、原代細(xì)胞與常規(guī)細(xì)胞系的本質(zhì)差異

與 HEK293、HeLa 等永生化細(xì)胞系相比，原代細(xì)胞通常具有以下特點：

• 內(nèi)吞活性較低

• 對外界刺激高度敏感

• 對培養(yǎng)條件依賴性強

• 修復(fù)能力有限

這意味著：
?? 原代細(xì)胞并不“適合"依賴內(nèi)吞機制的轉(zhuǎn)染方式。

二、脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染在原代細(xì)胞中的局限性

脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染在分子生物學(xué)實驗中應(yīng)用廣泛，但其原理決定了它在原代細(xì)胞中的適用性有限：

1. 高度依賴內(nèi)吞過程
   原代細(xì)胞內(nèi)吞效率低，導(dǎo)致外源核酸進入細(xì)胞的比例本身就不高。

2. 細(xì)胞毒性難以避免
   即使轉(zhuǎn)染效率略有提升，也往往以細(xì)胞存活率顯著下降為代價。

3. 實驗重復(fù)性差
   不同批次細(xì)胞狀態(tài)的微小差異，都會放大轉(zhuǎn)染結(jié)果的波動。

因此，在原代細(xì)胞實驗中，脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染常常表現(xiàn)為“偶爾成功，但難以復(fù)現(xiàn)"。

三、電轉(zhuǎn)染是否是更合適的選擇？

電轉(zhuǎn)染通過瞬時電場作用，在細(xì)胞膜上形成短暫通道，使外源分子直接進入細(xì)胞內(nèi)部，從理論上繞過了內(nèi)吞過程。

但傳統(tǒng)電轉(zhuǎn)染方法也存在明顯問題：

• 電場分布不均

• 局部過強電擊

• 熱效應(yīng)明顯

在原代細(xì)胞中，容易造成不可逆損傷。

四、微量電轉(zhuǎn)染技術(shù)的改進思路

近年來，一種基于**微量電轉(zhuǎn)染（Microporation）**的技術(shù)路線逐漸受到關(guān)注，其核心思路在于：

• 縮小轉(zhuǎn)染體積

• 構(gòu)建更加均勻、可控的電場

• 減少細(xì)胞暴露在高能電擊中的時間

在這一思路下，一些新型臺式電轉(zhuǎn)染系統(tǒng)被用于原代細(xì)胞和免疫細(xì)胞研究中，并在轉(zhuǎn)染效率與細(xì)胞存活率之間取得更好的平衡。

五、聯(lián)系我們

原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染并非簡單地“換一種試劑"就能解決，其本質(zhì)是轉(zhuǎn)染機制與細(xì)胞生物學(xué)特性的匹配問題。
在越來越多高難度應(yīng)用場景中，研究人員開始重新審視轉(zhuǎn)染方法本身，并探索更適合原代細(xì)胞特性的技術(shù)路徑。

如需了解原代細(xì)胞轉(zhuǎn)染相關(guān)的實驗思路或技術(shù)方案，可聯(lián)系相關(guān)技術(shù)支持。